Pharmaceutical Technology Brasil Ed. 3-19

Pharmaceutical Technology 86 Edição Brasileira - Vol. 23 / Nº3 de ferramentas moleculares, iii) capacidade de modificações pós-tradução, ex. glicosi- lação, e iv) secreção proteica e downstre- am. Entre eles, a Escherichia coli, de fácil modificação genética, tem a vantagem de crescer rapidamente em substratos versá- teis, tais como hidrolisados de levedura, e de produzir um título elevado de proteína. Como uma das empresas líderes globais em extração de leveduras (YE) e fabricação de peptonas de levedura, o Procelys fornece nutrientes animal-free de alto desempenho para a fabricação de biofarmacêuticos. Em resposta à crescente demanda por hidrolisados proteicos de alta qualidade e consistentes, os Laboratórios de Aplicações da Procelys desenvolveram um bioensaio de desempenho usando GFP como um biomarcador para expressão gê- nica para investigar os produtos derivados de levedura ProCel®, como por exemplo, performance de extrato de levedura (YE) e de peptona de levedura (YP) para produção de proteína em E. coli Bl21. A E. coli BL21 (DE3) (BF-dcm ompT hsdS (rB-mB-) gal [malB +] K-12 ( λ S)) contendo o plasmídeo perst-EmGFP (Fig. 1) foi utili- zada neste estudo. A GFP foi expressa como uma proteína de fusão sob o promotor do bacteriófago T7 induzida por isopropil – β -D-thiogalactopyranosido (IPTG). Condições de crescimento Meio de cultura • Microplacas e frascos de agitação: Meio proprietário Procelys contendo glicose, Extrato de levedura + peptona de levedura (HYP-A), sais, minerais e glicerol, Luria-bertani (LB) e meio Terrific broth (TB) +/- ampicilina (100 µgmL-1). • Modo batelada alimentada (es- tratégia de cultivo de alta densidade de células): Meio proprietário Procelys O s processos relacionados à biotec- nologia podem ser fundamentalmente considerados como uma transformação de nutrientes e outros componentes do meio de cultura em biomassa e / ou pro- dutos moleculares. A utilização de fontes de carbono e nitrogênio, que tende a ser facilmente avaliada através de equilíbrios estequiométricos totais, é geralmente mais complexificada por mudanças no metabo- lismo causadas por componentes do meio, como fatores de crescimento, vitaminas e oligoelementos. Após os progressos notáveis na tecnolo- gia de DNA recombinante, a expressão de genes heterólogos em diversos hospedeiros permitiu a bioprodução industrial de uma vasta gama de proteínas recombinantes. Vários organismos são atualmente utiliza- dos para a produção de proteína recom- binante e, mais particularmente, E. coli, de longe, o cavalo de batalha preferido da indústria. Uma das escolhas mais críticas no design de bioprocessos é a seleção de um hospedeiro adequado que depende: i) eficiência de cultivo no upstream, ii) ma- nipulação genética fácil e disponibilidade PUBLINOTA Alain Sourabié , Ph.D. a.sourabie@procelys.lesaffre.com Screening de nutrientes deri v ados de le v edura para expressão de proteína recombinante em Escherichia coli FIGURA 1 pRSET/emGFP construção do plasmídeo de E. coli BL21 usado neste estudo