Pharmaceutical Technology Brasil Ed. 3-19

Pharmaceutical Technology 87 Edição Brasileira - Vol. 23 / Nº3 contendo extrato de levedura + peptona de levedura, sais, minerais e glicerol ou glicose. Cultivo • Preparação de Culturas Semente: Antes de inocular os fermentadores para cultivo em batelada alimentada, uma pré- -cultura emmeio proprietário foi realizada a 37°C com glicerol adicionado a uma con- centração final de 15% (p/v), a cultura de sementes foi então aliquotada em porções de volume adequado e cuidadosamente armazenada a -80 °C até o uso. • Batelada e cultivo de alta densidade celular: Uma alíquota da cultura semente foi primeiramente descongelada e ressus- pendida emmeios proprietários Procelys. O inóculo foi subsequentemente transferido para o fermentador de 7,5 L. O cultivo em batelada foi realizado com 3 L de meio proprietário complexo. A temperatura foi controlada a 37°C enquanto o controle de pH estava sendo regulado a 6,8 com hidróxido de amônia. A concentração de oxigênio dissolvido (DO) foi mantida em 30% de saturação aumentando a velocidade de agitação (200 - 1.200 rpm e ajustando a adição de fluxo de ar através de um aspersor em anel. As condições de cultivo foram auto- maticamente mantidas pelo controlador como descrito abaixo: 1. Fase de batelada (alvo µ = 0,5-0,7), durando até o consumo total da fonte de carbono inicial, glicerol. 2. Batelada alimentada (alvo 0,11 <μ <0,2). Reduzir a taxa de crescimento evita o excesso de substrato e a alta produção de acetato. 3. Pós-indução de batelada alimentada (alvo μ = 0,08). Começa com injeção IPTG, menor taxa de alimentação para melhorar FIGURA 2 Screening de extratos de levedura e peptona de levedura para o crescimento de E. coli Bl 21 FIGURA 3 Extração de extrato de levedura para o crescimento de E. coli Bl21